تشخیص مولکولی سودوموناس آئروژینوزا با استفاده از پروب نانوذرات طلا

تکنیک های مولکولی مانند واکنش زنجیره ای پلیمراز (pcr) روش تشخیصی سریع و قابل اعتماد برای شناسایی پاتوژن های میکروبی می باشند. در دهه¬های اخیر در پی درمان آنتی¬بیوتیکی، سودوموناس آئروژینوزا به عنوان یکی از مهم¬ترین پاتوژن بیمارستانی شناسایی شده است که باعث عفونت¬های حاد و مزمن در افراد بستری در بیمارستان می¬شود. بسیاری از روش های تشخیصی بر اساس pcr برای شناسایی سودوموناس آئروژینوزا توسعه یافته اند، بااین حال بسیاری از پروتکل ها تنها یک ژن هدف را شناسایی می کنند و این روش ها، شناسایی جامع و قابل اعتمادی را برای شناسایی این باکتری فراهم نمی نمایند، زیرا گونه سودوموناس آئروژینوزا گرفته شده از بیماران تنوع ژنوتیپی بالایی را نشان می دهد. برای غلبه بر این مشکلات از چندین روش pcr استفاده شده است. اما با توجه به مبادلات ژنتیکی بین سودوموناس آئروژینوزا و باکتری های مرتبط نزدیک به آن این تکنیک اغلب اختصاصیت پایینی دارد. بنابراین نیاز به طراحی روش¬های واجد اختصاصیت بالا مبتنی بر پروب اختصاصی و multiplex pcr برای تأیید تشخیص سودوموناس آئروژینوزا وجود دارد. در این مطالعه از دو روش مولکولی multiplex pcr و روش رنگ سنجی نانوذرات طلا استفاده و حساسیت و اختصاصیت این دو روش مورد ارزیابی قرار گرفت. بهینه سازی multiplex pcr و اختصاصیت و حساسیت آن با استفاده از چهار ژن اختصاصی سودوموناس آئروژینوزا (oprl، opri، toxa و rdna 16s) صورت پذیرفت و نتایج نشان دهنده اختصاصیت 100 درصد می باشد. برای ژن 16s rdna در نهایت تأیید تشخیص این باکتری با استفاده از پروب نانوذرات طلا مورد بررسی قرار گرفت. پروب متصل شده به نانوذرات طلا در حضور dna هدف باعث تجمع نانوذرات طلا به شکل شبکه ای متصل به هم و درنتیجه تغییر رنگ می شود. این تغییر رنگ نشان دهنده وجود مولکول هدف در نمونه بوده و به روش چشمی هم قابل مشاهده است.